TESIS PUCP
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PONTIFICIA UNIVERSIDAD CATÓLICA DEL PERÚ
FACULTAD DE CIENCIAS E INGENIERÍA
REDISEÑO DE UN TERMOCICLADOR PARA LA REPLICACIÓN DEL ACIDO
DESOXIRRIBONUCLEICO (ADN)
Tesis para optar el Título de Ingeniero Electrónico, que presenta el bachiller:
Jorge Martín Palma Lara
ASESOR: Ing. Willy Carrera Soria, Dra. Sayda Mujica
Lima, Abril del 2010
RESUMEN
El presente trabajo se basa en el rediseño de un Termociclador para la replicación
de ADN, empezando por la explicación de los procesos de replicación del acido
desoxirribonucleico, como sus características, condiciones y su desarrollo
tecnológico, también en el uso aplicativo del Termociclador empleado en dicho
proceso de replicación.
Para llevar a cabo la síntesis del ácido desoxirribonucleico (ADN) in vitro, se utiliza
un dispositivo electrónico llamado Termociclador. Este equipo regula
automáticamente la temperatura y el tiempo para completar un ciclo de PCR
(siglas en ingles Polimerase Chain Reaction) de manera tal, que la secuencia se
repita durante el tiempo programado, de acuerdo al interés del investigador.
Para la parte electrónica se presenta como solución a este rediseño un diagrama
de bloques, en el cual presenta las partes a conformar de un Termociclador, estas
se diferencian en etapas como son: Control, Potencia, Sensado, Comunicación
serial, entradas y salidas de datos, fuente de alimentación y diagrama de flujo del
funcionamiento del equipo. Para corroborar los cálculos efectuados y la selección
de componentes electrónicos en cada una de las etapas mencionadas, se
desarrolla la simulación, empleando diferentes programas de simulación como se
mencionan en el presente trabajo.
1
INDICE
INTRODUCCIÓN………………………………………………………………………….3
1. CAPITULO 1: PROCESO DE REPLICACION DE ADN………………..5
1.1 Generalidades sobre la replicación de ADN……….…………...5
1.2 Proceso de Replicación…………………………………..........…5
1.3 Técnica de la Reacción en Cadena de la Polimerasa (PCR)....7
1.4 Equipo empleado para la PCR……………………………... …...9
1.5 Detalles de los equipos que se utilizan para la replicación de
ADN………………………………………………………....……..11
2. CAPITULO 2: EL TERMOCICLADOR UTILIZADO EN EL PROCESO
DE REPLICACION DE ADN…………………………………………….......12
2.1 Estado del Arte………………………………………………….12
2.1.1 Presentación del asunto de estudio…………………...12
2.1.2 Estado de la investigación……………………………...12
2.2 Variables Externas……………………………………………...14
2.3 Variables Internas………………………………………………15
2.4 Análisis de la problemática…………………………………….17
2.5 Modelo teórico…………………………………………………..17
2.6 Hipótesis de la Investigación………………………………….18
2.6.1 Hipótesis Principal………………………………………18
2.6.2 Hipótesis Secundarias………………………………….19
2.7 Objetivos de la Investigación………………………………….19
2.7.1 Objetivos Generales…………………………………….19
2.7.2 Objetivos Específicos…………………………………...19
2.8 Universo y Muestra……………………………………………..20
2.9 Información para el desarrollo del sistema…………………..20
3. CAPITULO 3: REDISEÑO DEL EQUIPO TERMOCICLADOR COMO
SOLUCION A LA PROBLEMÁTICA………………………………………..21
3.1 Diagrama del sistema planteado……………………………….21
3.2 Etapa de Control…………………………………………………25
3.3 Etapa de Potencia……………………………………………….29
2
3.4 Sensado de Temperatura…………………………………….. 40
3.4.1 Etapa de sensado de temperatura…………………....40
3.4.2 Etapa de acondicionamiento de la señal del sensor..44
3.4.3 Etapa del Amplificador de Instrumentación………….53
3.4.4 Etapa de Filtro pasa bajo………………………………60
3.5 Comunicación del micro controlador con la PC a través de una
comunicación serial……………………………………………67
3.6 Etapa de ENTRADA/SALIDA…………………………………68
3.7 Fuente de alimentación………………………………………..73
3.8 Diagrama de Flujo del Programa del Termociclador………..84
4. CAPITULO 4: SIMULACIÓN DEL TERMOCICLADOR……………..87
4.1 Simulación del Software de control de temperatura………..87
4.2 Simulación del sensado de temperatura…………………….88
4.3 Manejo de las celdas Peltiers…………………………………91
CONCLUSIONES………………………………………………………………….......93
RECOMENDACIONES…………………………………………................................94
BIBLIOGRAFIA…………………………………………………………………………95
ANEXOS
3
INTRODUCCIÓN
El ADN es el soporte físico que contiene toda la información genética de un
organismo vivo, en donde un gen es un segmento de ADN que tiene una
determinada función y está constituido por una secuencia específica de bases
químicas. Para llevar a cabo la síntesis de ADN in Vitro se utiliza un equipo
electrónico llamado termociclador, es un equipo que regula automáticamente la
temperatura y los tiempos del proceso para completar un ciclo de PCR (del inglés
Polymerase Chain Reaction o en español Reacción en Cadena de La Polimerasa).
En nuestro país, los Termocicladores, debido a su alto costo, casi no se usan y por
consiguiente, no tenemos muchas investigaciones sobre Ingeniería Genética. En
el sector salud, por ejemplo, equipos como éste pueden aportar en los análisis de
enfermedades causadas por virus, bacterias y demás infecciones. Esto también
hace, que no se haya desarrollado la experticia necesaria para su uso y amplias
aplicaciones.
La diversidad de los equipos Termocicladores, que se encuentran en el mercado
internacional es inmensa, lo último es el TRobot, un termociclador que puede
integrarse en un sistema automatizado, por ejemplo, el robot retira las muestras,
cuando el proceso ha terminado este equipo fue desarrollado por Biometra. [1]
El presente trabajo de investigación corresponde a la fase III en el desarrollo del
diseño de un prototipo de termociclador, que se viene trabajando dentro de las
actividades del Grupo de Desarrollo de Equipos para Laboratorio -Equi-LaB.
4
El prototipo producto del presente trabajo se ocupa del rediseño del hardware y
software y de la bandeja porta muestras desarrollados en la fase I y II con el
objetivo de cumplir con las características de los equipos comerciales; al mismo
tiempo, se desarrollan capacidades técnicas nacionales, para la posterior
implementación y monitoreo del prototipo.
5
CAPITULO 1: PROCESO DE REPLICACION DE ADN
1.1 Generalidades sobre la replicación de ADN
El ADN es el soporte físico, que se encuentra en las células de todos los seres
vivos y que contiene toda la información genética de cada organismo. Para su
replicación la célula realiza el proceso de replicación del ADN.
Hace más de 30 años, la introducción de la tecnología de ADN recombinante
como una herramienta para las ciencias biológicas revolucionó el estudio de la
vida. La reproducción molecular permitió el estudio de los genes individuales de
organismos vivos; sin embargo esta técnica era dependiente de la obtención de
una cantidad relativamente grande de ADN puro. Los procesos que para este fin
se realizaban eran extremadamente laboriosos y difíciles en el caso de obtención
de ADN’s específicos, especialmente cuando se trataban de masa de genes en la
muestra biológica.
1.2 Proceso de Replicación
El proceso de replicación de ADN (ácido desoxirribonucleico) es la base de la
herencia del material genético. Se basa en la duplicación de la información
genética y su posterior división, ya que en toda célula que va a dividirse la
molécula de ADN debe duplicarse, para poder repartirse por igual en cada una de
las células hijas. Para ello las dos cadenas complementarias que componen la
doble hélice de ADN (molécula madre) deben separarse para poderse formar dos
6
nuevas cadenas, cada una de las cuales es complementaria a una de las cadenas
de la molécula madre. (Ver Figuras 1 y 2)
Así, la molécula de ADN de cada célula forma una doble hélice que presenta una
cadena vieja procedente de la molécula madre y otra recién sintetizada.
Fig. 1: Muestra un segmento de ADN en el que se ha iniciado el proceso de replicación en una molécula de
ADN y los elementos que actúan en el proceso. [2]
La replicación es semiconservativa, bidireccional y semidiscontínua. [2]
Semiconservativa:
En cada una de las moléculas hijas se conserva una de las cadenas
parentales.
Secuencial y bidireccional desde puntos fijos:
Los orígenes de replicación son los puntos fijos a partir de los cuales se
lleva cabo la replicación, que avanza de forma secuencial con estructuras con
forma de horquilla. Por otro lado, la replicación se lleva a cabo
7
bidireccionalmente, es decir, a partir de un punto se sintetizan las dos cadenas
en ambas direcciones. [2]
Semidiscontínua
La replicación siempre se da en sentido 5' → 3', siendo el extremo 3'-OH libre,
el punto a partir del cual se produce la elongación del ADN. Esto plantea un
problema, y es que las cadenas tienen que crecer simultáneamente a pesar de
que son anti paralelas, es decir, que cada cadena tiene el extremo 5'
enfrentado con el extremo 3' de la otra cadena. Por ello, una de las cadenas
deberá ser sintetizada en dirección 3' → 5'. [2] y es la cadena retrasada, que
hace uso de mas enzimas.
Fig. 2: Esta figura muestra en color rojo la síntesis de las cadenas hijas, que van avanzando de manera
bidireccional, de 5’ a 3’ para una de las moléculas hijas y de 3’ a 5’ en el caso de la otra molécula hija
retardada. Se puede apreciar en color azul la hebra de la molécula madre del ADN.
1.3 Técnica de la Reacción en Cadena de la Polimerasa (PCR)
La propiedad natural del ADN para replicar sus hebras, es el fundamento de la
técnica del PCR. Esta Técnica emplea ciclos de altas y bajas temperaturas
alternadamente para estimular la acción de las enzimas propias del proceso y
8
separar las hebras de la molécula de ADN; de esta forma se duplica la molécula
de ADN patrón en nuevas moléculas en cada ciclo de replicación. (Fig. 1).
Este proceso duplica rápida y selectivamente partes específicas de una molécula
de ADN permitiendo producir miles de millones de copias por medio del desarrollo
del proceso de PCR de Kary Mullis, quien obtuvo el Premio Novel en 1993.
El PCR consta de tres etapas fundamentales, definidas rigurosamente por los
tiempos y las temperaturas correspondientes:
Etapa inicial – de 2 a 10 minutos a 95°C
Etapa intermedia – Alrededor de 30 ciclos con la siguiente secuencia:
- Separación del ADN (Melt) – 30 segundos a 95°C
- Anillado (Anneal) – 30 segundos a 60°C
- Alargamiento (Extend) – 45 segundos a 72°C
Etapa Final
- Alargamiento – de 7 a 10 minutos 72°C
- Conservación – 4°C (Conservar a esta temperatura)
Durante los 30 ciclos de la etapa intermedia, la separación o desnaturalización
(Melt) está destinada a separar las hebras de la doble hélice de ADN, por medio
del calentamiento a 95°C durante 30 segundos, del micro tubo que contiene la
mezcla de reacción de la PCR. Los primers o cebadores no pueden pegarse al
ADN a esa temperatura, por lo cual el tubo se enfría a 60°C. A esta temperatura
los primers se pegan (anillan) al ADN monocatenario (una sola cadena). La razón
9
por la cual las dos cadenas de ADN monocatenario no se anillan entre sí, es el
gran exceso de primers en la mezcla, por lo tanto es mucho más probable que el
ADN monocatenario se anille con un primer que con la otra cadena de ADN. El
alargamiento (Extend) consiste en subir la temperatura a 72°C por 45 segundos, lo
cual permite a la ADN polimerasa alargar la copia de la hebra de ADN. Cada ciclo
tarda alrededor de 2 minutos en producirse, al final del cual se duplica cada
fragmento de ADN (ver Figura 3). Luego de 30 ciclos se producen más de 1000
millones de copias de ADN. [2]
Figura 3. Ciclo básico del Proceso de Reacción en Cadena de la Polimerasa, en el que se muestra la
temperatura y tiempo para cada etapa del proceso. [6]
1.4 Equipo empleado para la PCR
Hoy, todo el proceso de la PCR está automatizado mediante un aparato llamado
termociclador, que permite calentar y enfriar el micro tubo que contiene la muestra,
controlando la temperatura necesaria para cada etapa de la reacción. El
Termociclador, regula automáticamente la temperatura y el tiempo, para
10
completar un ciclo de PCR de manera tal, que la secuencia se repite durante el
tiempo, que se haya programado, de acuerdo al interés del investigador. Muchos
Termocicladores modernos hacen uso del efecto Peltier, que permite tanto
calentar como enfriar los tubos simplemente invirtiendo la corriente eléctrica. Los
microtubos, que contienen las muestras usados para PCR tienen una pared muy
fina, lo que favorece una buena conductividad térmica, permitiendo que se alcance
rápidamente el equilibrio térmico.
Casi todos los termocicladores tienen un sistema que calienta la tapa de cierre,
donde se encuentran las muestras, con el fin de evitar la condensación sobre los
microtubos de reacción. Actualmente, Los Termocicladores más avanzados,
incluyen un gradiente de temperatura, que permite optimizar las condiciones de
temperatura de cada paso de la reacción para la amplificación de un solo
patrón.[6]
En el prototipo, que se viene trabajando y objeto de esta tesis, se están usando
elementos termoeléctricos (ver Anexo 1) llamados Peltier. En ciertos modelos de
termocicladores, las reacciones se realizan en placas de 96 huecos, cada uno con
una fibra óptica. En otros modelos, hay una fibra óptica en frente de los tubos [7].
Entre los equipos similares a nuestro módulo están aquellos que utilizan
principalmente la tecnología Peltier para calentar y enfriar un bloque sobre el que
se ubican los microtubos donde van las muestras de ADN, siendo este bloque de
un material de alta conductividad térmica
Por lo general, la PCR es una técnica común y normalmente indispensable en
laboratorios de investigación médica y biológica para una gran variedad de
aplicaciones. Entre ellas se incluyen la clonación de ADN para la secuenciación, la
11
filogenia basada en ADN, el análisis funcional de genes, el diagnóstico de
trastornos hereditarios, la identificación de huellas genéticas (usada en técnicas
forenses y pruebas de paternidad) y la detección y diagnóstico de enfermedades
infecciosas. [4]
1.5 Detalles de los equipos que se utilizan para la replicación de ADN
Los equipos Termocicladores son desarrollados bajo normas que se exigen para
su elaboración y uso en el área donde se va desempeñar dicho equipo [8]. La
empresa Biometra es una de las que se dedica a la elaboración y diseño de
Termocicladores a nivel mundial; siguiendo los avances tecnológicos esta
empresa ha desarrollado el TRobot; equipo totalmente automatizado [1]. El
objetivo es simplificar las operaciones del análisis de la replicación del ADN con un
índice de precisión óptimo para su credibilidad en el proceso de replicación de
ADN.
12
CAPITULO 2: EL TERMOCICLADOR UTILIZADO EN EL PROCESO DE
REPLICACION DE ADN
2.1 Estado del Arte
2.1.1 Presentación del asunto de estudio
La Técnica del PCR para la multiplicación del ADN ha sido automatizada en el
equipo Termociclador. El desarrollo de esta tesis se centra en el rediseño del
hardware y software del prototipo en el que se viene trabajando. Para ello se están
usando elementos termoeléctricos llamados módulos Peltier, ellos son
componentes electrónicos basados en un semiconductor que funciona como una
pequeña bomba de calor (ver Anexo 1). En ciertos modelos de termocicladores,
las reacciones se realizan en placas de 96 huecos, cada uno con una fibra óptica.
En otros modelos, hay una fibra óptica en frente de los tubos.
Entre los equipos similares a nuestro módulo están aquellos que utilizan
principalmente la tecnología Peltier para calentar y enfriar un bloque sobre el que
se ubican los microtubos donde van las muestras de ADN, siendo este bloque de
un material de alta conductividad térmica.
2.1.2 Estado de la investigación
Los Termocicladores de hoy trabajan bajo un fundamento principal que es el
efecto Peltier, adecuado para aplicaciones que requieren la manipulación de la
temperatura (módulos de refrigeración o calefacción). Los módulos se
13
construyeron desde un dispositivo de refrigeración comercial electrónico basado
en el efecto Peltier con una serie de microsondas adjuntas a la parte superior de
su superficie. Las microsondas fueron fabricadas por LIGA (acrónimo alemán de
lithographie, galvanoformung, abformung), uno de los procesos de los sistemas de
micro electromecánica. La transmisión de calor se realiza por efecto de pasar una
corriente por el circuito de uniones semiconductoras p-n y n-p unas se calientan y
otras se enfrían, produciéndose un gradiente de temperatura entre las placas. [10]
El tamaño de las microsondas de 1000 - μm fue fabricado en una placa de titanio
y, a continuación, en la parte superior un dispositivo comercial Peltier. Cuando
una corriente eléctrica es suministrada al dispositivo Peltier, la parte superior (con
microsondas), enfría el dispositivo y la otra parte se calienta. El calor es conducido
desde una muestra hasta la superficie de la parte superior del dispositivo Peltier.
La máxima diferencia entre la temperatura de una muestra con la superficie del
dispositivo Peltier fue aproximadamente de 1°C. (Ver Anexo 2)
Este interesante fenómeno se mantuvo reducido a algunas pequeñas aplicaciones
hasta ahora, época en que se comienza a utilizar sus posibilidades con más
frecuencia. Como se mencionó anteriormente.
La amplificación de PCR mediante el termociclador haciendo uso de tubos
capilares finos permitió completar un ciclo rápido, y síntesis del ADN en 20s.
La velocidad de los cambios de temperatura alcanzados en estos sistemas ha
permitido la definición exacta de los grados óptimos de la temperatura para cada
paso individual en el ciclo de PCR. Los ciclos termales de la nueva generación de
termocicladores también acomodan más muestras, tienen perfiles termales más
exactos, y son programables. [11]
14
15
Diseño del
Termociclador
INICIO
Diseño de la
bandeja metálica
(Portamuestra)
Diseño del proceso
de calentamiento y
enfriamiento para
las celdas peltier
Diseño del
Circuito de
Potencia
Diseño del circuito
de control
(microcontrolador)
Presentó falla el
proceso?
FIN
Separador de
tierras
(optocoplador)
Rediseñar el
sistema de
control de
temperatura
NO
SI2
2
1)No se tiene
control de la
ejecución de la
bandeja
2)No se llegue al nivel
de voltaje adecuado
dependiendo si desea
calentar o enfriar
4)El problema que
habría si no se
separaran las
tierras
3)No pueda
entregar la energía
necesaria a las
celdas peltier
5)Proceso
discontinuo
Interface
usuario equipo
2.3 Variables Internas.
Fig. 4 El Diagrama de Flujo presenta en los recuadros oscuros las variables que se comenta en el
cuadro 1
16
Hechos Problemas y Causas
1) No se llega al delta de cambio de
temperatura/seg. deseado en el
funcionamiento de la bandeja.
Este problema está referido a la forma
de diseño y composición de la
bandeja. Una respuesta del delta de
temperatura de 1° C/seg. es lo que se
estima para que el equipo funcione
correctamente.
2) No se llega al nivel de voltaje
adecuado dependiendo si desea
calentar o enfriar.
Esto se presentará cuando el sistema
de control de temperatura no da como
salida el nivel de voltaje necesario
para que vaya hacia las placas Peltier.
3) No pueda entregar la energía
necesaria a las celdas Peltier.
Este tipo de problemas depende del
diseño de la fuente que se va a
desarrollar para que pueda cumplir con
los requerimientos de funcionamiento.
4) El problema que habría si no se
separaran las tierras.
Este problema es común cuando el
diseño de cada proceso no tiene
fuentes independientes ya que se
recarga la intensidad de corriente y
esto perjudica el desempeño del
equipo.
5) Proceso discontinuo.
Las posibles fallas que pueda
presentar el equipo, dependerá de una
adecuada respuesta, para lo que se
deberá realizar un rediseño de todo el
proceso y con el fin que el equipo
pueda tener una respuesta continua.
Cuadro 1. Explica los hechos que se han de tener en cuenta en el rediseño y que presenta el
Diagrama de Flujo de la figura 4.
17
2.4 Análisis de la problemática
Un Termociclador es un equipo que permite la multiplicación in Vitro de una
secuencia de ADN mediante procesos continuos de calentamiento y enfriamiento
a muy alta velocidad (mayores a 1°C/seg), por lo que se plantea la construcción e
implementación de un prototipo que cumpla con estos objetivos con tecnología al
alcance en nuestro medio. Este prototipo debe cumplir con los objetivos
planteados y debe garantizar un proceso efectivo de PCR.
El prototipo se construye principalmente para introducir una alternativa de
instrumento para los trabajos en Biología Molecular que requieran de
Termocicladores y poder entrar en el mercado nacional.
2.5 Modelo teórico
El primer paso en el desarrollo de un Termociclador consiste en establecer los
rangos de temperatura que va desde 4°C a 95°C, cada protocolo de PCR de
acuerdo a la muestra que se ha de replicar tiene su propio perfil de temperatura.
La temperatura, es un factor importante en la replicación del ADN, una vez
establecidos los protocolos de temperatura y tiempo, se determinará la cantidad
de ciclos que el equipo realizará en un determinado protocolo para poder replicar
la muestra de ADN deseada. Una vez establecido el protocolo, se debe proceder a
realizar el calentamiento y enfriamiento de la muestra, esto se realiza por medio
de celdas Peltier, estas actúan a modo de una bomba de calor electrónica. En
estas se aplica una tensión positiva o negativa dependiendo si se desea calentar o
enfriar las muestras respectivamente.
18
Con todo lo visto en el estado del arte, se tiene conciencia de que para desarrollar
un equipo que pueda lograr un buen desempeño y que sea robusto es necesario
tener conocimientos de electrónica de potencia y sistemas de control de la misma,
para determinar el buen control de la temperatura.
Uno de los problemas que puede presentar el equipo es la precisión; como se
sabe el desarrollo de la replicación del ADN, actúa bajo niveles de precisión que
los Biólogos conocen y prueban. Para la solución a este problema se implementa
un microcontrolador que se encarga de almacenar los diferentes protocolos.Tener
un registro de los ensayos en la computadora es de gran utilidad para el análisis y
evaluación de las muestras. Asimismo la interfaz del equipo debe ser simple y no
requerir de un hardware adicional.
2.6 Hipótesis de la investigación
2.6.1 Hipótesis principal
La experiencia obtenida en el proyecto: Termociclador: Controlado Térmico
Programable Digitalmente [30] y los avances mediante el análisis por Elementos
Finitos en el nuevo diseño de los elementos de la bandeja porta muestras del
Termociclador [27], ha permitido tener un diseño, que virtualmente logra una
distribución uniforme de las temperaturas; de esta simulación se tienen los datos
necesarios para la selección de la potencia del módulo Peltier requerido [Anexo 2].
Estos avances hacen necesario un rediseño del sistema de control térmico-tiempo
y módulo digital programable, a fin de mejorar el hardware del equipo y alcanzar
las características de equipos similares del mercado.
19
2.6.2 Hipótesis secundarias
La simulación del comportamiento de la bandeja brinda la información para
la selección de la potencia de los módulos Peltier a usar en el proceso.
Integrando lo avanzado en la fase I y fase II, permitirá obtener una mayor
precisión de temperatura, manteniéndolo dentro del margen de error (±
0.5°C) y obtener un mayor gradiente de calentamiento enfriamiento mayor
a 1°C/s.
La interfaz del equipo con el usuario ha de ser simple, permitiéndole
almacenar diferentes protocolos de temperatura.
2.7 Objetivos de la investigación
2.7.1 Objetivo general
Rediseño del hardware y módulo digital programable de un prototipo de
termociclador para el control térmico de la bandeja porta-muestras. Este equipo
debe cumplir con las características de equipos similares del mercado.
2.7.2 Objetivos específicos
Rediseño acorde al Peltier seleccionado en la segunda fase del proyecto
referido al estudio de las características de la bandeja [6] para obtener el
eficiente desempeño del hardware. (± 0.5ºC )
Obtener una rampa de calentamiento /enfriamiento de 1º C/seg.
20
Diseño de una interfaz de usuario de fácil manejo con teclado numérico y
un visualizador gráfico de pantalla de cristal líquido para poder hacer la
programación de los ciclos del PCR.
Rediseño de la comunicación con un computador personal vía puerto serial
RS-232 para el envío de datos en tiempo real y programación del sistema
desde el computador.
2.8 Universo y muestra
El Universo está formado por la variedad de equipos existentes en el mercado
para el desarrollo de procesos de replicación de ADN.
El ámbito son los laboratorios de investigación en Biología Molecular, que usan la
técnica de PCR.
La muestra es un prototipo de Termociclador, que se viene desarrollando de
manera interdisciplinaria dentro del Grupo Equi-LaB conjuntamente con del Grupo
de Métodos Computacionales para la Ingeniería (GMC).
2.9 Información para el desarrollo del sistema
Para el desarrollo del sistema, tomamos como referencia lo elaborado en las dos
fases anteriores. Estas son:
En la fase 1 Termociclador: Controlado Térmico Programable Digitalmente [30]
En la fase 2 análisis por Elementos Finitos del nuevo diseño de la bandeja porta
muestras del Termociclador [27], tarea encargada a la Facultad de Mecánica.
En esta fase 3 se desarrollará avances basado en las dos fases anteriores.
Mayor detalle revisar en el Anexo 2 que se encuentra adjunto a este documento.
21
CAPITULO 3: DISEÑO DEL EQUIPO TERMOCICLADOR COMO
SOLUCION A LA PROBLEMATICA
3.1 Diagrama del sistema planteado
Efectuar el proceso de PCR (Reacción en Cadena de La Polimerasa) requiere de
un sistema que pueda controlar de manera precisa la temperatura a las que se
debe calentar un conjunto de muestras de ADN.
En el Grupo de Desarrollo de Equipos para Laboratorio -Equi-LaB de la PUCP se
planteó desarrollar un proyecto de termociclador en nuestro país, este proyecto se
dividió en dos fases
En la Fase I se desarrolló un prototipo de termociclador que cumpliera con el
control del rango de temperatura en el tiempo adecuado para que simulara el ciclo
de una PCR. El problema que se tuvo en esta fase fue poder encontrar el material
adecuado para la bandeja porta muestra, que pueda llegar a obtener un gradiente
de 1°C/s.
Entonces se derivó a una Fase II cuya investigación estaría a cargo de la
Especialidad de Ingeniería Mecánica, en dicha fase se encargaría el estudio y
desarrollo de una bandeja metálica que cumpliera con el rango de temperatura
antes mencionado. De ello se determinó que se debería de cambiar el tipo de
Peltier y las dimensiones de la bandeja porta muestra trabajado en la Fase I.
El presente trabajo de investigación corresponde a la fase III, el desarrollo del
rediseño de un prototipo de termociclador, que pueda responder adecuadamente
junto con lo elaborado en la fase II por los Ingenieros Mecánicos.
22
La figura 5 muestra el sistema planteado en la fase I para el desarrollo del
prototipo del termociclador, y en la Figura 6 se plantea el rediseño del
termociclador el cual consta de las siguientes etapas:
Etapa de Entrada de Datos: Aquí se ingresan los datos de temperatura y tiempo.
Etapa de Salida de Datos: Se muestra los datos de temperatura y tiempo.
Etapa de Control: Se encarga de controlar los niveles de temperatura en la
bandeja porta muestra variando la potencia suministrada al peltier, de acuerdo a
los tiempos indicados en la etapa de entrada, también se encarga de la
adquisición del sensado de temperatura y la visualización en la etapa de salida.
Etapa de Potencia: Se encarga de entregar los niveles de corriente y voltaje que
requiere el Peltier para su funcionamiento y responda adecuadamente a los
niveles de temperatura ingresados en la etapa de entrada.
Bloque Metálico: Esta etapa consta de los peltier, su disipador de calor y la
bandeja porta muestra. El diseño de esta etapa estuvo a cargo del área de
Ingeniería Mecánica.
Sensor de temperatura: Se encarga de sensar la temperatura del bloque metálico.
Fuente de Alimentación: Esta etapa se encarga de alimentar todo el sistema,
teniendo en consideración la etapa de potencia la cual requiere de un mayor nivel
de voltaje y corriente para poder controlar el Peltier.
23
Fig. No 5 Sistema planteado en la Fase 1
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Fig. No 6 Sistema planteado en la Fase 3
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FU
EN
TE
D
E
A
LI
M
EN
TA
C
IÓ
N
25
3.2 Etapa de Control
El requerimiento que se debe tener en cuenta para esta etapa es que el sistema
pueda responder a los niveles de temperatura y tiempo requeridos para completar
el proceso de PCR; de acuerdo a lo desarrollado por la sección de Mecánica,
para obtener un adecuado proceso de PCR, se estableció que las rampas de
temperatura (ver figura 7.1) en los estados transitorios deben ser en promedio
1.3▫C/s o mayores, esto debido a que procesos con rampas de temperatura
menores a 1▫C/s no son adecuadas para llevar con éxito una buena PCR [27].
Fig. No 7.1 Ciclo Térmico de la PCR [27]
Para mantener el nivel de temperatura y que no sobrepase un margen de error de
+/- 0.5°C, la sección de Mecánica estableció de acuerdo a las simulaciones
realizadas, que el equipo deba estar herméticamente cerrado en todo su contorno,
de tal forma que las pérdidas de calor disminuyan a valores muy pequeños y
además las células peltiers dejarían de funcionar solo en el momento de mantener
la temperatura constante [27]. Logrando un comportamiento como se muestra en
la figura 7.2.
26
-8
-6
-4
-2
0
2
4
6
8
10
12
0 31 60 91 12
1
15
2
18
2
21
3
24
4
27
4
30
5
33
5
tiempo (s)
co
rr
ie
nt
e
(A
)
cuirva de corriente
Fig. No 7.2 Curva de corriente [27]
Aquí se muestra el comportamiento de tipo ON-OFF de la corriente durante el
proceso de la PCR, en el capítulo 4.1, se explicará con más detalle la obtención de
esta curva.
Para la simulación, el tiempo que le toma en ejecutar el programa la parte de
adquisición de datos del sensado de temperatura que es 325.8ms, ambos datos
tomados del simulador VMLAB que cuenta con un cronómetro interno a una
frecuencia de 1MHz, este tiempo depende de la cantidad de instrucciones que
conforma dicho programa, que para el sensado, es T1 como tiempo de ejecución.
No se toma el tiempo de ejecución para la visualización en el LCD y el ingreso de
los datos por el teclado matricial debido a que son de menor tiempo y son
despreciables.
T1 = 325.8ms ….. (1)
Tener en cuenta que este tiempo (T1) es solo de ejecución del programa; el
periodo máximo de la PWM para controlar la célula Peltier es de 3.3ms (~300Hz),
que es recomendado por los fabricantes de TE Technology para asegurar un buen
27
rendimiento y no generar en él fatiga térmica, se trabajará a una frecuencia de
4KHz (~ 250us).
Para la etapa del sensado requerimos un tiempo de muestreo de 312.5ms, debido
a que, la tasa de cambio de temperatura debe ser de 1.3°C/s, lo cual, tomaremos
la mitad de tiempo para obtener mejores datos del sensado de temperatura cada
0.5°C. Así, nuestro tiempo seria 0.62s (ver figura 7.3) equivalente a 1.6Hz y
frecuencia de muestreo a 3.2Hz (~312.5ms) cumpliendo los criterios de Nyquist.
Figura 7.3 Rampa de calentamiento-enfriamiento
[Imagen de elaboración propia]
Realizando los cálculos previos: tomando (1) y (2)
T2=250us+312.75ms=312.75ms……. (2)
T=T1+T2= 638.55ms, Como se puede apreciar la suma de los tiempos del
sensado y de simulación de programa, está dentro del segundo de la tasa de
cambio de temperatura como se muestra en la figura 7.3 lo cual debe contar el
equipo termociclador.
La frecuencia de trabajo del micro controlador es:
F=1/ T = 1/638.55ms
F=1.6 MHz……………… (3)
28
En la respuesta (3) se determina a que frecuencia mínima debe de trabajar el
micro controlador, para una correcta ejecución del control y no sobrepasar el
margen de error de ± 0.5°C.
La cantidad de memoria utilizada en el micro controlador es la mínima posible,
llegando a 1Kbytes, luego tenemos en cuenta la cantidad de puertos a utilizar en
el equipo que es 23 puertos. La tabla 2.3 muestra micros controladores que
cumplen con nuestros requisitos:
Características Atmega16L PIC16F877
Rango de Voltaje de alimentación 2.7 a 5.5V 2.0 a 5.5V
Corriente consumida 15 mA 25 mA
Rango de frecuencia del Reloj interno 1 a 16 MHz 1 a 20 MHz
Memoria Flash 16 Kbytes 14 Kbytes
Memoria EEPROM 512 bytes 256 bytes
Resolución del ADC interno 8 a 10 bits 8 a 10 bits
Modo de Programación
Serial (SPI) y
Paralelo
Puerto paralelo
esclavo(PSP)
Número de puertos programables
(I/O) 40 40
Puertos de E/S A,B,C,D A,B,C,D,E
TABLA 2.3 Características Principales del Atmega16L y PIC16F877 [31] [32]
Como se puede apreciar en la tabla 2.3, los dos micros controladores cumplen con
nuestros requisitos. Por lo tanto, el micro controlador seleccionado es el
Atmega16L, debido a que se posee dominio en el manejo y programación de dicho
micro controlador.
29
3.3 Etapa de Potencia
El requerimiento que se debe tener en cuenta para esta etapa es el de entregar la
energía necesaria a las celdas peltiers para su correcto funcionamiento. Para
cumplir con este propósito debemos tener en cuenta elegir los integrados
correctos. Se parte de la elección de la célula peltier y luego se pasa a elegir el
driver que se encargará de controlar el sentido del paso de la corriente, para
calentar o enfriar la célula peltier.
Con las investigaciones realizadas en la segunda fase, se obtuvo que la célula
Peltier se seleccionó por su capacidad de enfriamiento, es decir, por el calor que
es capaz de absorber. Se tomaron en cuenta el mayor calor presente en una de
las etapas de enfriamiento, el cual fué: 294.1 W, para una bandeja porta muestra
de 48 pocitos, de dimensiones 88 mm x 66mm. [27]
Se puede apreciar en los datos de las células Peltier de TEC TECHNOLOGY, son
de 40 mm x 40mm [4], es decir, se podrá colocar 2 células Peltier en contacto con
la placa porta muestra, lo cual llevó al modelo cuyos datos se aprecian en la Tabla
2.4:
Imax
(amps)
-SORT- 5
Qmax
(watts)
-SORT-
Vmax
(volts)
-SORT-
DTmax
(Th=300K)
-SORT-
DTmax
(Potted)
-SORT-
A
(mm)
-SORT-
B
(mm)
-SORT-
H
(mm)
-SORT
11.3 172 24.6 67 66 40 40 3.2
Tabla 2.4. Datos del Peltier seleccionado. [3] [11]
Una vez brindado este resultado, se continúa la etapa de potencia propiamente
dicha.
30
El requisito para esta etapa es poder controlar el sentido de corriente en la célula
peltier, teniendo en cuenta los parámetros de voltaje y corriente que son 11.3A y
23V por célula peltier. Para ello se emplea un Puente H con capacidad de
corriente de 22.6 A y 23 V (dos células peltiers son usados en paralelo):
Para esta etapa uno de los requerimientos que deben tener los Drivers de mosfets
es poder controlar el sentido de la corriente para calentar o enfriar las células
peltier a través de la PWM generada por el micro controlador a una determinada
frecuencia. Cada circuito integrado debe manejar dos MOSFET, necesitándose
por consiguiente dos circuitos integrados para completar la configuración Puente H
para la célula Peltier.
31
Características de los Drivers de Mosfets:
El LT1160 de LINEAR TECHNOLOGY cuyas características son:
Opera en un rango de 10V a 15V.
1.5 A máximo de corriente.
75V de protección contra sobre voltaje.
El TC4432 de MICROSHIP cuyas características son:
Opera en un rango de 5V a 30V.
1.5 A máximo de corriente.
4KV de protección contra sobre voltaje.
Se puede apreciar, que los equipos mencionados anteriormente cumplen con las
características indicadas. Se elige el LT1160, debido a que se posee mayor
información de diseño como se muestra en la figura 9. A continuación la
configuración sugerida por el fabricante:
Figura 9.- Circuito integrado de control del puente H. (ver Anexo 4)
[Imagen de elaboración propia]
32
Se debe elegir el tipo de mosfet a controlar de acuerdo a requerimientos, el cual
pueda soportar cada mosfet de canal n y canal p una corriente de 22.6 A a 23V.
Cumplen dos tipos de mosfets:
CANAL N
IRFZ34 IRFZ44
Soporta una corriente de 30 A @
Tc=25˚C
Soporta una corriente de 50 A @
Tc=25˚C
Soporta una corriente de 21 A @
Tc=100˚C
Soporta una corriente de 36 A @
Tc=100˚C
Voltaje de 60 V. Voltaje de 60 V.
Potencia de Disipación a 88 W. Potencia de Disipación a 150 W.
Resiste a una temperatura de 175°C. Resiste a una temperatura de 175°C.
CANAL P
IRF4905 IRF5210
Soporta una corriente de -74 A @
Tc=25˚C
Soporta una corriente de -40 A @
Tc=25˚C
Soporta una corriente de -52 A @
Tc=100˚C
Soporta una corriente de -29 A @
Tc=100˚C
Voltaje de -55 V. Voltaje de -100 V.
Potencia de Disipación a 200 W. Potencia de Disipación a 200 W.
Resiste a una temperatura de 175°C. Resiste a una temperatura de 175°C.
Como se aprecia, el mosfet IRFZ44 (canal n) y el IRF4905 (canal p), cumplen
debido a que poseen mayor capacidad de corriente, con estas características
puede soportar los niveles de corriente de 22.6 A que le llegarán a las células
peltiers con normalidad.
Se calcula el disipador que debe colocarse al Mosfet IRFZ44 con empaquetadura
TO-220, con temperatura ambiente de 25˚C:
33
La hoja de datos del IRFZ44 y IRF4905 indica que el Rth j-c es de 1ºC/W y
0.75°C/W respectivamente. Además, su temperatura máxima de la unión, Tj, es de
175ºC. Como la unión con el disipador será en contacto con mica más pasta de
silicona termo conductora se supone Rth c-d de 1.2ºC/W. La potencia de
disipación de ambos es de 50W para este modelo de empaquetadura. Con estos
datos se calcula Rth d-amb [28]:
Por lo tanto, el disipador de los transistores deberán tener una resistencia térmica
como mínimo de 0.8ºC/W y 1.05°C/W respectivamente. La elección del modelo,
como se muestra en la figura 10, es el disipador de espesor de 140mm para
IRFZ44 y un espesor de 104mm para IRF4905.
Figura 10. Diseño de Disipador IRFZ44 [28]
34
Siguiendo la configuración sugerida por el fabricante como se muestra en la figura
9, diseño recomendado de los inductores y capacitancia (Lf y Cf respectivamente).
Cuya función es la de un filtro pasa bajo, debido a que las células peltiers trabajan
con tensión continua.
El cálculo del inductor se obtiene de la siguiente forma:
Tiempo de apagado
Donde:
Vsal = voltaje máximo de salida que deberá entregar la fuente a los peltiers= 23V
Vent = voltaje máximo de entrada al filtro= 30.4V
fconm = frecuencia de conmutación o de switcheo=4 KHz (~ 250us)
Reemplazando los valores en la formula anterior, se obtiene:
tapag= (1 – (23V / 30.4V) / 4KHz)
tapag= 60.8 us
Cálculo del inductor Lf
Donde:
Vsal = voltaje máximo de salida que deberá entregar la fuente a los peltiers= 23V
∆IL = corriente que le llega a la carga= 22.6 A
Reemplazando los valores en la formula anterior, se obtiene:
Lf = inductancia mínima requerida= (23V * 60.8us) / 22.6A =61.8 uH
35
Para el inductor de tipo toroide, el número de espiras que debe tener es: [29]
Lf (mH) = (AL * N²) / 10000
Los datos obtenidos para determinar el tipo de toroide y el color de cable a usar
dependiendo a que frecuencia deseamos trabajar se encuentra en el Anexo 6. A
continuación obtenemos el número de espiras (N) con los datos obtenidos, valor
de inductancia (Lf) es 61.8 uH y su permeabilidad magnética (AL) es 40:
N = 3.93 ~ 4
El diseño quedará con los siguientes parámetros:
Diámetro exterior = 9.4 mm
Diámetro interior = 5.1 mm
Sección horizontal = 2.15 mm
Altura = 3.3 mm
Longitud de cable = 10.9 mm
AL= 40
Numero de espiras = 4
Cable de color rojo = 1 – 30 MHz
Modelo = T-37
Figura 11. Inductor de tipo Toroide [29]
36
Y por último, la capacitancia Cf:
Reemplazando se obtiene: Cf = 22.6 A / (8 * 4KHz * 1Vpp) = 706.25 uF
El capacitor de tipo comercial a usar es: 710 uF @ 50V
La onda PWM del micro controlador brindada, ingresará primero a un opto
acoplador para separar la señal digital del circuito neto de potencia, los cuales
manejan a las células Peltiers conectados en paralelo y que su velocidad de
conmutación sea de acuerdo a la frecuencia a la cual van a trabajar. Los que
cumplen estos requerimientos son:
Opto acoplador 4N29:
Voltaje de Entrada: 10V.
Tiempo de conmutación: 40us.
Corriente directa: 80 mA.
Corriente de colector: 50 mA.
Opto acoplador 6N136:
Voltaje de Entrada: -0.5 a 30V.
Tiempo de conmutación: 0.8 us.
Corriente Directa: 25 mA.
Corriente de colector: 8 mA.
Velocidad de transmisión: 1Mbit/s.
Se elige al 6N136, por su alta velocidad de conmutación llegando a 1.25 MHz. A
continuación se muestra el diseño (ver figura 12) sugerido por el fabricante:
37
Para la etapa de enfriamiento de las células peltiers, se utilizará un ventilador,
también producto de la fase II, que cumple con las siguientes características como
se puede apreciar en la Tabla 2.5:
Modelo Dimensiones (mm) Flujo (m3/h) Corriente (A) Voltaje
DC(V)
F-12038X24-2 120x120x38 323 0.6 24
Tabla 2.5. Datos del ventilador seleccionado. [27]
Mediante el siguiente circuito (Figura 13) se hará el control de encendido del
ventilador cuando se requiera enfriar los peltiers:
Figura 12. Diseño del opto acoplador 6N136
[Imagen de elaboración propia]
38
Efectuando los cálculos previos, para obtener los valores de R1, R2 y R3 que
mostramos a continuación:
Cálculo de R1:
R1= (5V – 1.5V) / 20mA = 175 Ω.
Figura 13. Circuito de control del Ventilador
[Imagen de elaboración propia]
39
Cálculo de R2 y R3:
Ic’ = 2.5mA = Ib’; donde Ic’ es la corriente de colector en saturación del opto
acoplador con una corriente If=20mA, de acuerdo a su hoja de datos trabaja con
un hFE= 24 para corte y saturación.
Vb’= 5V - 0.4V – 0.8V – 0.75V = 3.05V
Fijamos la resistencia R2 = 3.05V / 2.5mA = 1.22KΩ, para que pase una corriente
de Ic’=2.5mA
Ic’’ = 60mA = Ib’’; donde Ic’’ es la corriente de saturación del transistor, de acuerdo
a su hoja de datos trabaja con un hFE=10 para corte y saturación.
Vb’’= 5V - 0.2V – 0.75V = 4.05V
Fijamos la resistencia R3 = 4.05V / 60mA = 67.5 Ω, para que pase una corriente
de Ic’’= 50mA
Calculamos el disipador que debe colocarse al transistor 2N4401 y BCV71 con
empaquetadura TO-92 (temperatura ambiente de 25˚C):
De la hoja de datos del 2N4401 y BCV71, Rth j-c es de 83.3ºC/W. Además, su
temperatura máxima de la unión, Tj, es de 150ºC. Como la unión con el disipador
será contacto con mica mas pasta con silicona termo conductora supondremos
40
Rth c-d de 0.9ºC/W. La potencia de disipación es de 1.4W para este modelo de
empaquetadura. Calculo de Rth d-amb [28]:
Por lo tanto, el disipador del transistor deberá tener una resistencia térmica como
mínimo de 5.1ºC/W. El disipador a usar con espesor de 60mm.
3.4 Sensado de Temperatura
Esta etapa consta de un sensor de temperatura, acondicionamiento de la señal del
sensor, amplificador de instrumentación y Filtro pasa bajo.
3.4.1 Etapa de Sensado de temperatura:
Para nuestro sensado debemos tener en cuenta los requerimientos, el
mecanismo de adquisición de temperatura es el más sensible del sistema puesto
que debe de asegurarse que la temperatura leída es la temperatura real del
Figura 14. Diseño de Disipador 2N4401 y BCV71 [28]
41
bloque. Para el sensado de los niveles de temperatura que se puede usar para las
muestras de ADN, tenemos muchos componentes en el mercado, como son:
Termocupla, Termómetros de resistencia, Termistores y Termómetros de unión
PN [14] [15]. En el cuadro 2.7 se resume las ventajas y desventajas de los
sensores mencionados:
De acuerdo a las consideraciones mencionadas en el cuadro 2.7 se elige como
sensor de temperatura al termistor, ya que las aplicaciones en las que se puede
usar son genéricas, son de fácil manipulación (encapsulado pequeño), poseen un
rápido tiempo de respuesta, y ofrecen altas precisiones.
Como característica adicional se puede mencionar la intercambiabilidad que
poseen los termistores lo que los hace fácilmente reemplazables.
42
El inconveniente en este tipo de sensor es la linealidad, los termistores de tipo
NTC son los que pueden aproximarse con menor error a una ecuación lineal. Sin
embargo, varios esquemas de linealización de la curva Resistencia vs.
Temperatura son propuestos. Éstos consisten en agregar una resistencia ya sea
en serie o en paralelo [15] para modificar la gráfica Resistencia vs. Temperatura. A
continuación, en la figura 15, se muestra el cambio que se produce al agregar una
resistencia en paralelo al termistor.
La empresa Yellow Spring Instruments ofrece el YSI Thermilinear component, que
consiste en dos termistores conectados en paralelo en un mismo encapsulado Los
beneficios adicionales que se consiguen son un fácil diseño, una alta resolución en
la medida y el circuito electrónico tendría un bajo costo.
Entre la familia del YSI Thermilinear component, aquellos que ofrecen las
características más adecuadas a los requerimientos del sistema es el YSI 44018
43
(Figura 16a) y el YSI 44019A (Figura 16b), los cuales poseen las siguientes
características:
Características del Termistor YSI44018:
Máxima temperatura de operación: 105 ºC
Precisión: ±0.15 ºC
Intercambiabilidad: ±0.15 ºC
Tiempo de respuesta máxima: 1 segundo en aceite agitado
10 segundos en aire quieto
Constante de disipación mínima: 8 mW/ºC en aceite agitado
1 mW/ºC en aire quieto
Rango de medición de temperatura: -80 a 105°
Características del Termistor YSI44019A:
Máxima temperatura de operación: 85 ºC
Precisión: ±0.4 ºC (0 a 85 °C)
44
Intercambiabilidad: ±0.4 ºC (0 a 85 °C)
Tiempo de respuesta máxima: 1 segundo en aceite agitado
10 segundos en aire quieto
Constante de disipación mínima: 8 mW/ºC en aceite agitado
1 mW/ºC en aire quieto
Rango de medición de temperatura: -55 a 85°C
El sensor que ofrece un mejor desempeño para esta etapa es el YSI44018, por lo
que se utilizará en el desarrollo de esta etapa.
3.4.2 Etapa de Acondicionamiento de la señal del sensor:
La etapa de acondicionamiento se da a través de un puente Wheatstone [15], el
cual genera dos voltajes, uno de referencia y otro que varíe con la resistencia del
termistor. Los valores de las resistencias de dicho puente dependen del termilineal
a utilizar.
El fabricante desarrolla una aplicación para el acondicionamiento de la señal de
sensado a través una red termilineal (Thermilinear Network) el cual consiste de
dos subcomponentes: un termilineal y un set de resistencias (Resistor set) que son
resistencias de película de metal de precisión. Esta red puede ser utilizada para
sensado de temperatura con Voltaje lineal vs. Temperatura o Resistencia lineal vs.
Temperatura dependiendo de la configuración utilizada.
45
En las figuras 17 y 18 se muestran las configuraciones desarrolladas por el
fabricante:
46
Entre los dos modos presentados, se escogerá el de voltaje ya que presenta el
circuito de acondicionamiento recomendado por Webster [12] para procesos de
medición de temperatura.
La relación voltaje - temperatura está definida en la siguiente ecuación:
Donde:
Vout = Voltaje de salida
m = Cambio de voltaje por grado (slope)
Vin = Voltaje de entrada
T = Temperatura en grados Celsius (ºC)
b = Voltaje a 0ºC y 1 voltio (Vin) (desplazamiento a 0ºC o intercepto)
Esta red, que implica una configuración de medio puente, tiene limitaciones en
cuanto al rango de medición debido a que ésta se reduce notablemente; pero, al
realizar la configuración del puente completo reducimos esta limitación ya que la
medición no se hace desde tierra, sino desde un voltaje de referencia extraído del
puente:
47
En esta configuración, se aprecia 3 resistencias adicionales a la configuración
original (R3, R4 y R5) de donde se extrae el voltaje V1 el cual puede ser fijo o
variable dependiendo si se fija o no la resistencia R5. RL representa la resistencia
equivalente entre las dos salidas del puente. Se debe tener en cuenta que el uso
de resistencias variables trae consigo una entrada de error ya que ocurre una
constante pérdida de calibración de la misma. Es por esta razón que utilizaremos
una resistencia fija, el cual dará un voltaje fijo V1.
Cada red ofrece características diferentes en la curva Resistencia vs Temperatura.
Para el sensor elegido se tiene una red de resistencia disponible, cuyas
características se describen en la tabla 2.8.
48
Según los requerimientos establecidos en el ítem 3.1.2 para el desarrollo del
sistema, la red termilineal 44202 y 44204 cumplen con las características
señaladas. Se utilizará la red termilineal 44202 debido a que se disponen de las
resistencias necesarias para poder implementar esta red.
Las características técnicas de la red 44202 se detallan a continuación:
Componente termilineal: YSI44018
• Precisión e intercambiabilidad: ± 0.15 °C
• Red termilineal a usarse: 44201
• Set de resistencias: R1 = 3.2 KΩ, R2 = 6.25 KΩ
• Rango de aproximación lineal: 0 a 100°C
• Voltaje de alimentación máximo: 2.0 V
• Corriente de entrada máxima: 625 μA
• Error de resistencia: ±0.14°C @ 0°C
±0.03°C @ 100°C
• Desviación lineal: ± 0.216°C
49
• Constante de disipación: 1 mW/ºC en aire quieto
8 mW/ºC en agua fluyendo
• Modo de resistencia:
Rt = (− 17.115)*T + 2768.23 (Ecuación 3.2)
• Modo voltaje negativo:
Eout = (− 0.0053483* Ein)*T + 0.86507* Ein (Ecuación 3.3)
• Modo voltaje positivo:
Eout = (0.0053483* Ein)*T + 0.13493* Ein (Ecuación 3.4)
Observaciones:
Error de resistencia: Posible error en el circuito en grados centígrados por el
0.1% de error en la exactitud del valor de la resistencia.
50
Voltaje negativo: Fórmula para calcular el voltaje a través de la red
termilineal en T2 (Figura 19).
Voltaje positivo: Fórmula para calcular el voltaje a través de R1 (Figura 19).
La etapa de acondicionamiento de señal estará comprendida por el puente
Wheatstone. El fabricante del termilineal determina una serie de pasos para el
cálculo de los valores de las resistencias del puente Wheatstone [16] para obtener
los valores indicados:
• Paso 1: El rango de medición debe ser establecido.
El rango de medición estará definido de acorde a los requerimientos establecidos.
En nuestro caso, por la red que será utilizada, se puede obtener un rango de
medición de 0 a 100°C el cual cubre nuestro requerimiento (4 a 95°C).
• Paso 2: Determinación de la constante de sensibilidad.
En este caso, se fijará Ein por lo que se podrá calcular la pendiente. Como los
pasos son negativos, entonces se tendrá que a una mayor temperatura, menor
será el valor de la resistencia.
En la ecuación 3.3, cuando se tiene una temperatura de 0°C se obtiene:
Eout = 0.86507*Ein (Ecuación 3.5)
Y de la ecuación 3.2 la resistencia Rt obtenida a la misma temperatura será:
Rt = 2768.23Ω
51
Si fijamos Ein = 1.5ڄV, entonces a 0°C se obtiene:
Eout = 1.297605V
Entonces se puede definir los pasos por cada grado
Si T=1ºC, se tiene: Eout = 1.28958255V
Diferencia de voltaje entre grados:
Pendiente= − 8.02245*mV/°C
• Paso 3: Cálculo de la disipación de potencia
Se calculará el auto calentamiento para evaluar el efecto de la potencia disipada
en el Termistor T2 sobre la precisión en la medida. Esta se realizará utilizando la
temperatura máxima en el rango determinado en el paso 1.
Según el anexo 4, a 95ºC, el termistor T2 debe tener una resistencia de 2402 Ω.
Aplicando la fórmula de potencia:
Donde:
52
P = Disipación de potencia (Watts)
V = Voltaje a la máxima temperatura
R = Resistencia a la temperatura máxima en el rango seleccionado
Calculo del voltaje Eout a la máxima temperatura (95 ºC)
Aplicando a la ecuación 3.3 se obtiene:
Eout = 0.53547225V
Calculo de la potencia:
P = 0.12mW
Para el error por auto calentamiento se utiliza la constante de disipación, el cual
nos proporciona la conversión de Watts a grados centígrados.
Para aire quieto tenemos:
Error auto calentamiento = 0.12mW/ 1mW/°C = 0.12°C
Paso 4: Determinación de R3, R4 y R5
El objetivo de este paso es elegir dichas resistencias de tal manera que se
obtenga 0 V a la salida cuando se tenga una temperatura de 4ºC. Para comenzar,
se debe tener como dato los valores de resistencia de T1, R2 y T2 (Figura 19)
medidos a 4°C. El equivalente de estas resistencias se llamará Rcal. Una manera
de hallar Rcal es calculando la resistencia Rt y sustrayendo el efecto de R1.
De la ecuación 3.2, hallando Rt para 4°C (Rt a 4°C):
Rt = 2699.77 Ω
Calculando Rcal:
Rcal = 17270.58 Ω
53
Otra resistencia (R5) es agregada en esta parte con la finalidad de controlar el
valor de 0V. El valor de esta resistencia es igual a dos veces el error (o tolerancia)
de R3 y R4 (asumiendo que tienen el mismo error). Cuando se realiza el diseño
del circuito, asumimos que una mitad del valor de la resistencia de R5 está
incluido en R3 y la otra mitad en R4.
Eligiendo R4 = 78 KΩ (con una precisión de ±0.2%), calculamos R5 sólo para
efectos del cálculo de R3:
R5= 2*(0.002·78000Ω) = 312Ω
R3 se calcula a partir de R4 y R5 mediante la siguiente ecuación:
R3 = [R1*(R4 + R5/2) / Rcal] – R5/2
Calculando R3 se obtiene:
R3 = 14325.23 Ω ~ 14.32 KΩ
De los valores comerciales, el más cercano es el de 14 KΩ, por lo que se tendrá:
R3 14 KΩ
Por lo tanto, se determina lo siguiente:
Valores de resistencias de la etapa de acondicionamiento de señal (todas las
resistencias elegidas tienen una precisión de 0.2%, excepto R1 y R2 que tienen
una precisión de 0.1%):
R 1= 3.2 KΩ
R2 = 6.25 KΩ
R 3= 14 KΩ
R 4= 78 KΩ
Ecuación de salida de la etapa de acondicionamiento de señal:
54
Eout = - 0.00802245 x T + 1.297605 x (voltios) (Ecuación 3.8)
Por último, se considera el error introducido por el sensor de temperatura, donde
se utiliza la pendiente de la ecuación 3.8 para poder convertir la precisión de la
temperatura en voltaje. Expresando la precisión del sensor (±0.15°C) en mV se
obtiene que ésta es igual a ±1.2mV.
Sumando el error introducido por el sensor en la ecuación 3.8 se obtiene:
Eout = - 0.00802245 x T + 1.297605 x (voltios) ±1.2mV (Ecuación 3.8.1)
La configuración del sensor de temperatura es:
3.4.3 Etapa del Amplificador de Instrumentación:
La salida de voltaje del puente Wheatstone está definida en la ecuación 3.8.1,
donde la variación de voltaje ante un aumento de 1°C es de – 8.02245 mV. Ya que
esta variación es muy pequeña para poder manejarla con las etapas siguientes
55
(filtro analógico y conversor analógico digital) y también susceptible al acoplo de
ruido externo [17], se coloca una etapa de amplificación de señal con la finalidad
de poder resolver estos inconvenientes.
Para ello se utiliza un amplificador de instrumentación cuyo esquema se muestra
en la figura 21:
Las características más importantes del amplificador de instrumentación
(correspondiente a la figura 21) son:
• La ganancia de voltaje, desde la entrada diferencial (E1 − E2) a la salida simple,
se define por medio de una sola resistencia (aR).
56
• La impedancia en las dos entradas es muy alta y no cambia aunque se varíe la
ganancia. Esto es debido al seguidor de línea colocado en cada entrada del
amplificador.
• Vo no depende del voltaje en modo común de E1 y E2 (voltaje de modo común),
sólo de su diferencia (inmunidad al ruido).
De los amplificadores de instrumentación ofrecidos en el mercado se tiene los
desarrollados por Analog Devices, National Semiconductor y Burr-Brown (Texas
Instruments). Se observa que son escasos los amplificadores ofrecidos por
National Semiconductor que poseen las características de precisión necesarias
para el desarrollo del sistema, en tanto que Analog Devices si ofrece
amplificadores con características de precisión, pero son muy costosos. Se optó
por el uso de amplificadores de la compañía Burr-Brown (Texas Instruments).
Específicamente el uso de la familia INA. Se basa en la variedad de amplificadores
de instrumentación con altas características de precisión ofrecidas por el
fabricante.
Para el diseño del sistema, al elegir el amplificador se debe tener en cuenta las
siguientes consideraciones de diseño dadas por el fabricante [19] [20]:
• Para una precisión de ±0.5°C (requerimiento del diseño), se debe tener en
cuenta la pendiente de la ecuación 3.8.1, el cual es de 8.022 mV/°C. Entonces,
para pasos de 0.5°C, se tendrá variaciones de 4.011 mV. Es decir, el amplificador
debe tener un error en la entrada menor a 4.01 mV.
• El error en la ganancia debe ser menor que 4.01 mV x G, donde G es la
ganancia del amplificador.
57
• Alto rechazo en modo común (CMRR), de tal manera que el voltaje de salida no
sea afectado por el voltaje en modo común en la entrada. Esto implica que el
voltaje de salida del amplificador con la entrada en modo común deberá ser menor
que 4.01 mV x G para no afectar la medición. Las condiciones mínimas que debe
contar nuestro amplificador de instrumentación son de una señal de interferencia
de 1%. Es decir, los 4.01 mV *0.01 ~ 0.0401 mV. Por lo tanto, el CMRR mínimo
deberá ser:
Donde VCM es el voltaje de modo común en la entrada = 1.5V (ver figura 20)
CMRR ≥ 2*VCM / 40.1* 10-6= 3 / 40.1*10-6 = 74812.97
CMRRmin = 20*log (74812.97)= 97.48dB
• Como la señal de entrada es prácticamente continua (la frecuencia del sensor es
menor a 4 Hz), también se debe tener en cuenta el voltaje de desplazamiento que
genera el amplificador.
Según lo mencionado líneas arriba, se encontraron los siguientes amplificadores
que cumplen dichas características y que se mencionan en la tabla 2.9:
Características INA101 INA128
Ganancia
Error en la Ganancia ± 0.292% ± 0.5%
Desfase de entrada ± 340μV ± 225μV
Input bias current(por cada entrada) 30nA 10nA
Impedancia de entrada 10^10Ω 10^10Ω
Rango máximo de voltaje de entrada ± 15 V ± 15 V
Consumo de corriente de la fuente ≈ ± 6.7 mA ≈ ± 0.7 mA
CMRR 100dB 120dB
Ruido a la entrada 0.8 μVpp 0.2 μVpp
58
Para la asignación de valores en la tabla se tuvo que asumir una ganancia
específica (para este caso se eligió una ganancia igual a 10) ya que varias de las
características dependían del valor de ésta.
Según la tabla 2.9, los dos amplificadores cumplen con nuestros requerimientos,
por tal motivo escogemos el INA128U para nuestro diseño.
Se puede observar que en lo que respecta a la impedancia de entrada, ésta
genera corrientes en el orden de los nano amperios originando caídas de voltaje
que no perjudican la señal de entrada, como también sucede con las variaciones
de voltaje y corriente debido a la temperatura, los cuales tampoco perjudican dicha
señal. Adicionalmente, el rango de temperatura de operación abarca el rango de
operación del sistema a diseñar.
Para determinar el efecto del amplificador de instrumentación en la señal se
calcula primero el error de la entrada diferencial. Seguidamente sumaremos el
error introducido por el amplificador en la entrada y en la salida; y por último, la
ecuación de la señal de salida que se enviará a la siguiente etapa.
En el diseño de la etapa del sensor de temperatura determinamos, en la ecuación
3.8.1, el error atribuido a la precisión del sensor utilizado. Esta señal se colocará
en la entrada negativa del amplificador de instrumentación. En la entrada positiva
estará el voltaje fijo del puente Wheatstone determinado por las resistencias R3 y
R4. Se necesita calcular el error de dicho voltaje fijo. Ésta se puede expresar
como una variación de voltaje calculando el valor del voltaje en R4. El voltaje fijo
del puente (voltaje en R4) respecto de tierra es determinado de la siguiente
fórmula:
59
El cálculo de error se obtiene utilizando las siguientes ecuaciones:
Donde:
E = Error absoluto
ε = Error relativo
Teniendo como dato la precisión de las resistencias R3 y R4 a utilizar (±0.2%) y la
del voltaje de entrada (±0.1%) se obtiene:
V (R4) = 1.27 ± 1.69 mV
La señal diferencial a la entrada del amplificador será igual a la diferencia entre la
ecuación 3.8.1 y la ecuación 3.9:
Vin + = V (R4) = 1.27x (voltios) ± 1.69 mV
Vin - = Eout = (- 0.00802245 x T + 1.297605) x (voltios) ±1.2 mV
Vin+ - Vin - = (0.00802245xT (°C) - 0.027605)x (voltios) ± 2.89 mV (Ecuación 3.10)
La ganancia del amplificador estará determinada, según la ecuación del fabricante,
por el valor de la resistencia RG. El valor de la resistencia dependerá del factor de
amplificación que se desee darle a la señal. En el subcapítulo 3.4.4 elegimos el
conversor analógico digital ADS1110 el cual trabaja en el rango de -2.048 V a
+2.048 V (entrada diferencial). Para poder trabajar bajo este rango la ganancia del
60
amplificador no debe exceder de 5 (según el rango de medición de temperatura
planteado). Buscando valores de resistencia comerciales se eligió RG = 15 KΩ.
Entonces se tendrá:
De la tabla 2.9, sumando todos los errores en la entrada para la ganancia elegida
tenemos:
Σerrores en la entrada (INA128) = 223.9 μV
Por lo tanto, la ecuación 3.10 quedaría expresada de la siguiente manera:
Vin+-Vin-= (0.00802245xT (°C) - 0.027605)x (voltios) ± 3.12 mV (Ecuación 3.10.1)
El error incluido en la ecuación 3.10a se encuentra dentro del rango permitido por
el requerimiento (menor a 4.01 mV).
Para poder incluir el error de la ganancia en la señal de entrada en la ecuación a
la salida del amplificador se necesita utilizar la ley de propagación del error [21].
Sea la función y = f (x1, x2,...,xn ) , la ley de propagación del error se define como:
Donde Ea (x) y Ea (y) son los errores de x e y respectivamente. Calculando el
error de ganancia para el valor elegido (G = 4.33) se tiene:
G=4.33 ± 0.025
Sea: x1 = (0.00802245xT (°C) - 0.027605) x (voltios) ± 3.12 mV
X2 = 4.33 ± 0.04
61
Utilizando la ecuación 3.11 se calcula el error de la ecuación a la salida del
amplificador. Por lo tanto, la ecuación a la salida del amplificador será:
Vout = (0.03473721 ×T (°C) – 0.1195297) V ± 7.45 mV (Ecuación 3.12)
Para un cambio de 0.5°C se tiene en la salida del amplificador una variación de
17.37 mV (utilizando la pendiente de la ecuación 3.12). Se observa que el error en
la misma ecuación es menor que la variación mencionada por lo que el diseño
hasta este punto cumple los requerimientos planteados al inicio del presente
capítulo.
3.4.4 Etapa de Filtro pasa bajo:
En la etapa anterior, se tiene la señal del sensor acondicionada, amplificada y
disponible para la conversión analógica digital de la etapa de control; sin embargo,
debido al acoplo de una suma de diferentes tipo de ruido en la señal (mencionado
en la Etapa 1), se hace necesario colocar una etapa de filtrado. Esto tiene como
finalidad atenuar señales comprendidas en bandas de frecuencias ajenas a la
señal del sensor de temperatura.
Analizando los requerimientos del equipo, se tiene lo siguiente:
La señal del sensor de temperatura tiene una frecuencia menor a 4Hz
(revisar subcapítulo 3.2), dado que en el mejor de los casos, el tiempo de
respuesta es de 0.62 segundo (ver figura 7.3).
Entre la clase de filtros existentes (pasivos y activos), se decidió por el uso
del filtro activo. Como el rango de frecuencia de trabajo se encuentra
dentro del rango denominado baja frecuencia (de 1 Hz hasta 1 MHz), el
62
uso de un filtro pasivo, especialmente los que contienen componentes
inductivos, no llegan a ser eficientes, ya que los inductores llegan a tener
valores muy grandes haciendo al diseño voluminoso y caro [22].
Debido a la precisión de la señal, se debe tener en cuenta la respuesta en
frecuencia del tipo de filtro. Esto implica que en la banda de paso se tenga
una ganancia uniforme. El tipo de filtro que se adecua a esto tipo de
requerimientos es el de Butterworth. Éste nos ofrece la máxima respuesta
plana en la banda de paso. El único inconveniente que se puede tener con
en este tipo de filtro lo encontramos en la pendiente. Para obtener una
mayor pendiente, el incremento del orden del filtro es mayor en
comparación a otros tipos de filtro (p.e. Chebyschev, Bessel).
De acuerdo a nuestros requerimientos, mencionados anteriormente, para
obtener una mejor precisión en la toma de datos se utiliza un filtro del
integrado ADS1110 (en la etapa 1 se menciona el porque se elige este
integrado). Además, otra razón, es por el número de componentes utilizados
para un filtro activo pasa bajo, el cual hacía el circuito impreso no práctico.
La respuesta en frecuencia del filtro del integrado ADS1110 se muestra a
continuación:
63
Como se puede observar en la figura 22, se trata de un filtro pasa bajo el cual
tiene una frecuencia de corte de 4 Hz (aproximadamente). Estas características se
adecuan a los planteamientos mencionados líneas arriba. Por lo tanto, la señal a
la salida del amplificador se conectará directamente a la entrada del conversor
analógico digital.
Teniendo en cuenta las observaciones y requerimientos mencionados, se
planteará las características necesarias para la elección del conversor que se
utilizará en el diseño, los cuales son sugeridos en el Boletín Aplicativo de Texas
Instruments “Selecting and A/D Converter” [23] y “Análisis del ruido de
cuantificación de un convertidor A/D por simulación” [24]. Dicha lista de selección
se divide en dos áreas: Los factores primarios, los que definen las características
principales del conversor, y los secundarios, características adicionales pero no
menos importantes.
64
Factores primarios:
Nivel de precisión del conversor (el cual depende del nivel de precisión del
hardware a diseñar).
Resolución del conversor.
Naturaleza de la señal de entrada.
Velocidad de conversión.
Factores secundarios:
Número de canales requeridos.
Selección de referencia interna o externa.
Requerimientos de formato digital de salida.
Requerimiento de interfaz de salida.
Para poder cuantificar las características del conversor se tiene que fijar el voltaje
de referencia a utilizar. Para efectos de cálculo se coloca como voltaje de
referencia +5V. Esto implica que la resolución mínima será de 10 bits, para lo cual
se tendrá una cuantificación (q) de q= 5V / 2^10 = 4.88 mV. Entonces se tendrá
que 1LSB equivale a 4.88 mV.
A partir de esto se obtiene las condiciones mínimas que el conversor a elegir debe
cumplir:
• Resolución del conversor: 10 bits
• Error de desplazamiento: ±0.5 LSB
• Error de ganancia: ±0.5 LSB
• No linealidad diferencial: ±1 LSB
• No linealidad integral: ±1 LSB
65
• Naturaleza de la señal de entrada: Continua
• Velocidad de conversión: 10 SPS (muestras por segundo)
• Número de canales: 1 canal
• Voltaje de referencia: Interna
• Interfaz de salida: Transmisión serial
Una característica adicional importante es la relación señal a ruido (SNR). Según
la nota de aplicación de Texas Instruments [23], una regla eficaz pero no
sustentada para conseguir un valor de SNR aceptable en un conversor es
multiplicar la resolución por seis. Se tiene entonces:
SNR mínimo = 6 × Resolución (Ecuación 3.13)
En cuanto a la técnica de conversión más conveniente para la aplicación del
sistema a diseñar, según la guía de selección de amplificadores y conversores [19]
[25] la arquitectura Delta Sigma (ΔΣ) es la más apropiada. Está técnica se
caracteriza por tener una alta resolución, entrada diferencial y conversiones a baja
frecuencia [26]. De acuerdo a los requisitos mencionados, puede utilizarse como
conversor analógico digital a los integrados ADS1110 y ADS1100 (ambos de
Texas Instruments). Ambos conversores poseen las mismas características
eléctricas (ver Tabla 3.3) excepto por el voltaje de referencia que en el caso del
ADS1110 es interno y para el caso del ADS1100 es externo.
66
Características ADS110 ADS1100
Resolución 16 bits 16 bits
Error de desplazamiento ±1.2 mV ±2.5 mV
Error de Ganancia ±0.05% ±0.01%
No linealidad integral ±0.01% ±0.003%
Velocidad de Conversión
Hasta 240
SPS
Hasta 128
SPS
Numero de Canales 1 1
Interfaz de salida I²C I²C
Se elige el conversor analógico digital ADS1110, debido a que utiliza la técnica de
conversión sigma delta y está diseñado para aplicaciones de medición de
temperatura. Adicionalmente se obtiene el valor del SNR en las gráficas de la hoja
de datos del ADS1110. Para 16 bits se tiene que el SNR es de 98.08 dB [26]. Esto
cumple con la ecuación 3.13.
El ADS1110 está constituido de un conversor analógico digital sigma delta con
ganancia ajustable, un oscilador y una interfaz I2C.
El núcleo del conversor analógico digital consiste de un modulador delta-sigma
seguido de un filtro digital. El conversor mide la diferencia entre las dos entradas
de voltaje y las compara con un voltaje de referencia (2.048 ± 0.05% V). El filtro
digital recibe una cadena del modulador y expulsa un código, el cual es un número
proporcional a la entrada. El hecho de tener un voltaje de referencia interno
implica el ahorro de un circuito externo que realice la misma función.
Como se mencionó anteriormente, el código de salida es proporcional a la
diferencia entre las dos entradas analógicas. El número de bits necesarios para
representar el código de salida depende de la velocidad de transmisión, como se
muestra en la tabla 3.1:
67
Velocidad de Número Mínimo Máximo
transmisión de bits código código
15 SPS 16 -32768 32767
30 SPS 15 -16384 16383
60 SPS 14 -8192 8191
240 SPS 12 -2048 2047
La ecuación que determina la salida del conversor es:
(Ecuación 3.14)
En este caso, se utilizará una resolución de 16 bits lo cual corresponde como
código mínimo -32768 según se puede observar en la tabla 3.1. La ganancia será
unitaria. Entonces de la ecuación 3.14 se tendrá:
(Ecuación 3.15)
Cabe resaltar que al elegir la máxima resolución del conversor se tiene como
consecuencia una menor velocidad de transmisión, pero para la aplicación no
tendrá ninguna repercusión.
En las notas de aplicación de la hoja de datos el fabricante, se recomienda la
siguiente conexión del conversor (ver Figura 23):
68
Como se puede apreciar en el modelo de configuración típica del ADS1110 (figura
23), la interfaz I2C requiere que sus dos líneas de transmisión estén con
resistencias pull-up. En este caso el valor de las resistencias será de 10KΩ y
estarán alimentadas con +5V. Además se conectará la línea de entrada negativa
(Vin -) a tierra y la salida del amplificador (de la etapa anterior) a la entrada
positiva (Vin +). La alimentación requerida por el conversor es de +5V.
3.5 Comunicación del micro controlador con la PC a través de una
comunicación serial
Los requerimientos que se debe tener en cuenta son:
El tipo de comunicación es punto a punto.
La distancia requerida para la transmisión serial es de 2m.
69
Solo se conectará a un equipo.
Con estos requerimientos seleccionamos el integrado que se ajusta este estándar
del RS232 y es el max232, este es un DUAL EIA-232 DRIVERS/RECEIVERS
para que se pueda realizar la comunicación, este integrado actúa como un interfaz
entre la PC y el micro controlador Atmega16L.
Figura 24.- Circuito integrado MAX232
En la figura 24 los pines 11 y 12 van conectados a los de transmisión y recepción
del Atmega16L y su salida va al JP2 que representa a un conector DB9 macho.
3.6 Etapa de ENTRADA/SALIDA
Para la etapa de entrada y salida, los requerimientos que se pide es que las
condiciones de temperatura y tiempo de permanencia en ellas depende con cada
muestra, el sistema debe permitir el ingreso de parámetros fundamentales que son
temperatura, tiempo y número de ciclos el cual se desea que se le aplique a la
muestra y poder visualizarlos cada dato ingresado en una pantalla.
70
Como dispositivo para el ingreso de datos se utiliza un teclado matricial de 4x4(ver
Figura 25), es decir de 16 teclas. Este dispositivo periférico consta de 8 líneas que
se conectarán a las ocho líneas del puerto del micro controlador.
A continuación se muestran los diagramas de conexiones del teclado matricial
(Figura 25):
Figura 25. Circuito Teclado-Etapa de entrada
En este diagrama el valor de R=252Ω, este valor es calculado de acuerdo a la hoja
técnica del Atmega16L, sus puertos de entrada admiten un valor de 40mA como
máximo y la suma de todos sus puertos no debe exceder de 300 mA, así como lo
especifica en su hoja técnica, para nuestro cálculo asumiremos un valor promedio
de corriente de 20mA y la alimentación al teclado es de 5V, por ley de Ohm
calculamos el valor de la resistencia mínima, para ello la resistencia R deberá ser
mayor a 250Ω, para efectos prácticos usamos el valor de 252Ω de uso comercial.
Para la etapa de salida usamos un visualizador, el cual nos mostrará los valores
de temperatura y tiempo en el que se está ejecutando el ciclo de PCR,
71
adicionalmente dicho visualizador podrá mostrarnos figuras o gráficos para darle
una mejor visualización.
En un primer momento se pensó en trabajar con un LCD de caracteres, pero uno
de los requerimientos para el proyecto es que pueda mostrar no solo caracteres
sino también gráficas.
Por eso se utilizará un LCD gráfico, su configuración solo abarcará 8 pines del
micro controlador, debido a que la información y gráficos a mostrar serán de tipo
serial, en otras palabras se trabajará como maestro y esclavo, siendo maestro el
micro controlador y el esclavo el LCD gráfico.
A continuación se muestra el diagrama del LCD gráfico (Figura 26) junto con el
micro controlador Atmega16L:
72
73
De la Figura 26 el potenciómetro que se utiliza es para la regulación del back light
del LCD gráfico, se utiliza un conector para el flat del LCD que es de 30 pines. La
transmisión serial está conformada por los puertos PB3 (MOSI) y PB5 (SCK) del
Atmega16L conectados a los pines del LCD gráfico pin 13 y 12 respectivamente.
El Pin PC 6 del Atmega16L cumple la función de Reset, para esto utilizamos un
pulsador, cuando deseamos resetear el programa.
74
3.7 Fuente de alimentación
Los requerimientos que se debe tener en cuenta es el de entregar la energía
necesaria a todo el sistema, debido a que consume más energía que las demás y
se encargará de suministrar la energía necesaria a las células peltier que irán
conectados en paralelo y a su vez alimentará a la etapa de control, potencia,
sensado de temperatura, entrada y salida. Para el funcionamiento del ventilador se
utilizará una fuente que alimente solo a esta carga. En la siguiente tabla 3.2 se
muestra las etapas con los componentes a usar indicando su voltaje y corriente de
consumo:
ETAPA DE CONTROL CANTIDAD
VOLTAJE DE
ALIMENTACION
CORRIENTE
CONSUMIDA
ATMEGA16L 1 5V 40 mA
ETAPA DE ENTRADA Y SALIDA
TECLADO MATRICIAL 1 5V 80 mA
LCD GRAFICO 1 5V 160 mA
74LS04 2 5V 0.2 mA
ETAPA DE POTENCIA
LT1160 1 12V 0.25 mA
OPTOACOPLADORES 2 5V 76 mA
MOTOR VENTILADOR 1 24V 600 mA
PELTIER 2 23V 22600 mA
74LS04 1 5V 0.1 mA
ETAPA DE SENSADO DE
TEMPERATURA
INA128 1 12V Y ‐12V 13.4 mA
ADS1110 1 5V 0.35 mA
PUENTE WHEATSTONE 1 1.5V 0.48 mA
TOTAL: 23.57 A
75
Realizamos un resumen de fuentes, el cual mostramos en la siguiente tabla 3.3 la
cantidad de fuentes que requiere el sistema para ser alimentado:
FUENTE DE ALIMENTACION CORRIENTE CONSUMIDA (mA)
5V 357.13
12V 6.95
(‐)12V 6.7
23V 22600
24V 600
TOTAL : 23.57 A
Tal como se muestra en la tabla 3.3, se diseñará tres fuentes de alimentación, una
fuente a + 23 V @ 22.6 A, el segundo a + 24 V @ 1 A y el tercero a -12V @ 20
mA. Partimos de los cálculos que se muestran a continuación:
El equipo trabajara con un voltaje de entrada a 220V a una frecuencia de 60Hz,
para nuestros requerimientos utilizaremos un filtro con rectificador de onda
completa tipo puente como lo muestra la figura 27, para obtener una tensión de
+23 V @ 22.6 A.
Figura 27. Primera fuente de alimentación
[Imagen de elaboración propia]
76
Para obtener un diseño exacto de una fuente de alimentación, utilizamos las
curvas de Shade para el diseño de las fuentes de alimentación, el desarrollo de los
cálculos se muestran a continuación:
Tenemos:
Vdc = 23 V
Io = 22.6 A (representa la corriente total consumida por los peltiers)
Voltaje de rizado (p-p) = 3.8 Vpp (se escoge este voltaje de rizado para que no
exceda el voltaje máximo permitido por el peltier que es de 27V)
F = 60 Hz
En el Anexo 5, en la figura A se obtienen los siguientes valores:
Tomamos como parámetro para un puente de diodos: Rs/RL % = 30%
El cual obtenemos: WRLC = 7.7, con esto podemos obtener el rango mínimo del
capacitor con un atenuación de rizado:
rf= [Vrizado(p-p) / 2√2 * Vdc] * 100%
rf= 5.8%
De la figura B, con los datos Rs/RL%=30 y WRLC=7.7, obtenemos Vdc/Vm%=56%,
entonces:
Vdc / Vm = 23 / Vm = 0.56 Vm= 41 V
Rs/RL = 30% o Rs=R’s=0.3*RL = 0.3*(Vdc/Io) = 0.3*(23 V / 22.6 A) = 0.3 Ω
Con los datos obtenidos pasamos a obtener el capacitor:
C = WRLC / 2π*f (Vdc/Io)
C = 7.7 / 2*3.14*60*(23 V / 22.6 A) = 20080 uF
C = C1 + C2 + C3 = 20080 uF C1=C2=10000uF @ 50V y C3=100 uF @ 50V
77
Parámetros para la parte de rectificación:
IF(avg) = Io/2 = 11.3 A
IF(rms) = 2 * IF(avg) = 22.6 A
IF(pico) = 4.2 * IF(avg) = 47.5 A
PIV = Vm = 41 V (Se usa de 50 V para asegurar el margen)
Isurge = Vm / Rs = 136.7 A
De acuerdo a los cálculos obtenidos, elegimos el puente de diodos GBPC25005,
cuyas características se muestra en el Anexo adjunto. Cumpliendo así nuestros
requerimientos en los parámetros obtenidos.
Para el Transformador debe tener los siguientes parámetros de diseño:
Vs = {Vm + 2} / √2 = 30.4 VRMS
Resistencia en el secundario debe ser de 0.3 Ω
La corriente en el secundario debe ser: IRMS = √2 * 22.6 A = 32.0 A
La potencia aparente que debe tener el transformador con un puente de diodos de
onda completa es:
Vs * IRMS * √2 = 30.4 * 32.0 * √2 = 1.37 KVA
Una vez obtenidos los valores de diseño de la primera fuente pasamos a la
distribución de voltaje. Como en +Vo obtenemos 23 V @ 22.6 A se distribuye a las
células peltiers.
78
Figura 28. Segunda fuente de alimentación
[Imagen de elaboración propia]
Para la segunda fuente a diseñar trabajará con un voltaje de entrada a 220V a una
frecuencia de 60Hz, para nuestros requerimientos utilizaremos un filtro con
rectificador de onda completa tipo puente como lo muestra la figura 28, para
obtener una tensión de +24 V @ 1 A.
Para obtener un diseño exacto, utilizamos de nuevo las curvas de Shade, el
desarrollo de los cálculos se muestran a continuación:
Tenemos:
Vdc = 24 V
Io = 1 A (representa la corriente total consumida por todo el sistema)
Voltaje de rizado (p-p) = 4.1 Vpp.
F = 60 Hz
En el Anexo 5, en la figura A se obtienen los siguientes valores:
Tomamos como parámetro para un puente de diodos: Rs/RL % = 30%
El cual obtenemos: WRLC = 7.2, con esto podemos obtener el rango mínimo del
capacitor con un atenuación de rizado:
79
rf= [Vrizado(p-p) / 2√2 * Vdc] * 100%
rf= 6%
De la figura B, con los datos Rs/RL%=30 y WRLC=7.2, obtenemos Vdc/Vm%=52%,
entonces:
Vdc / Vm = 24 / Vm = 0.52 Vm= 46.2 V
Rs/RL = 30% o Rs=R’s=0.3*RL = 0.3*(Vdc/Io) = 0.3*(24 V / 1 A) = 7.2 Ω
Con los datos obtenidos pasamos a obtener el capacitor:
C = WRLC / 2π*f (Vdc/Io)
C = 7.2 / 2*3.14*60*(24 V / 1 A) = 796 uF ~ 800 uF
C = C1 + C2 = 800 uF C1= 470 uF @ 50V y C2= 330 uF @ 50V
C1=C1’ , C2=C2’
Parámetros para la parte de rectificación:
IF(avg) = Io/2 = 0.5 A
IF(rms) = 2 * IF(avg) = 1 A
IF(pico) = 12 * IF(avg) = 6 A
PIV = Vm = 46.2 V (Se usa de 50 V para asegurar el margen)
Isurge = Vm / Rs = 6.42 A
De acuerdo a los cálculos obtenidos, elegimos el puente de diodos W005G, cuyas
características se muestra en el Anexo adjunto. Cumpliendo así nuestros
requerimientos en los parámetros obtenidos.
Para el Transformador debe tener los siguientes parámetros de diseño:
Vs = {Vm + 2} / √2 = 34.1 VRMS
Resistencia en el secundario debe ser de 7.2 Ω
La corriente en el secundario debe ser: IRMS = √2 * 1 A = 1.41 A
80
Figura 29. Distribución de la fuente de alimentación a la carga
[Imagen de elaboración propia]
La potencia aparente que debe tener el transformador con un puente de diodos de
onda completa es:
Vs * IRMS * √2 = 34.1 * 1.41 * √2 = 68 VA
Una vez obtenidos los valores de diseño de la fuente se distribuye los niveles de
voltaje tal como lo muestra la figura 29:
Calculamos los disipadores que deben colocarse a los reguladores de voltaje
LM7824, LM7812 y LM7805 con empaquetadura TO-220, para nuestro cálculo
consideraremos una temperatura ambiente de 25˚C. Para la hoja de datos del
LM7824, LM7812, LM7805 sabemos que su Rth j-c es de 5ºC/W. Además, su
temperatura máxima de la unión, Tj, es de 150ºC. Como la unión con el disipador
será en contacto directo sin mica, supondremos Rth c-d de 0.8ºC/W. La potencia
de disipación es de 20.8W para este modelo de empaquetadura.
Con estos datos ya podemos calcular Rth d-amb [28]:
Por lo tanto, el disipador que le colocaremos al transistor deberá tener una
resistencia térmica como mínimo de 6.22ºC/W. La elección del modelo, como se
muestra en la figura 30, es el tipo de disipador con un espesor de 48mm.
81
Figura 30. Diseño de los Disipadores LM7824, LM7812, LM7805 [28]
Figura 31. Tercera fuente de alimentación
[Imagen de elaboración propia]
Para la tercera fuente a diseñar trabajará con un voltaje de entrada a 220V a una
frecuencia de 60Hz, para nuestros requerimientos utilizaremos un filtro con
rectificador de onda completa tipo puente como lo muestra la figura 31, para
obtener una tensión de -12 V @ 20 mA.
82
Para obtener un diseño exacto, utilizamos de nuevo las curvas de Shade, el
desarrollo de los cálculos se muestran a continuación:
Tenemos:
Vdc = -12 V
Io = 20 mA
Voltaje de rizado (p-p) = 2 Vpp.
F = 60 Hz
En el Anexo 5, en la figura A se obtienen los siguientes valores:
Tomamos como parámetro para un puente de diodos: Rs/RL % = 30%
El cual obtenemos: WRLC = 6, con esto podemos obtener el rango mínimo del
capacitor con un atenuación de rizado:
rf= [Vrizado(p-p) / 2√2 * Vdc] * 100%
rf= 6%
De la figura B, con los datos Rs/RL%=30 y WRLC=6, obtenemos Vdc/Vm%=54%,
entonces:
Vdc / Vm = 24 / Vm = 0.54 Vm= 22.2 V
Rs/RL = 30% o Rs=R’s=0.3*RL = 0.3*(Vdc/Io) = 0.3*(12 V / 0.02 A) = 180 Ω
Con los datos obtenidos pasamos a obtener el capacitor:
C = WRLC / 2π*f (Vdc/Io)
C = 6 / 2*3.14*60*(12 V / 0.02 A) = 26.54 uF ~ 27 uF
C = C1 = 27 uF @ 35V
Parámetros para la parte de rectificación:
IF(avg) = Io/2 = 0.01 A
IF(rms) = 2 * IF(avg) = 0.02 A
83
Figura 32. Distribución de la fuente de alimentación a la carga
[Imagen de elaboración propia]
IF(pico) = 11 * IF(avg) = 0.11 A
PIV = Vm = 22.2 V
Isurge = Vm / Rs = 0.12 A
De acuerdo a los cálculos obtenidos, elegimos el puente de diodos W005G, cuyas
características se muestra en el Anexo adjunto. Cumpliendo así nuestros
requerimientos en los parámetros obtenidos.
Para el Transformador debe tener los siguientes parámetros de diseño:
Vs = {Vm + 2} / √2 = 17.2 VRMS
Resistencia en el secundario debe ser de 180 Ω
La corriente en el secundario debe ser: IRMS = √2 * 1 A = 0.06 A
La potencia aparente que debe tener el transformador con un puente de diodos de
onda completa es:
Vs * IRMS * √2 = 34.1 * 1.41 * √2 = 1.5 VA
Una vez obtenidos los valores de diseño de la fuente pasamos a la distribución de
los niveles de voltaje tal como lo muestra la figura 32:
Calculamos el disipador que debe colocarse al regulador de voltaje LM7912 con
empaquetadura TO-220, para nuestro cálculo consideraremos una temperatura
ambiente de 25˚C. Para la hoja de datos del LM7912 sabemos que su Rth j-c es
de 5ºC/W. Además, su temperatura máxima de la unión, Tj, es de 150ºC.
84
Figura 33. Diseño de los Disipadores LM7912 [28]
Como la unión con el disipador será en contacto directo sin mica, supondremos
Rth c-d de 0.8ºC/W. La potencia de disipación es de 20.8W para este modelo de
empaquetadura.
Con estos datos ya podemos calcular Rth d-amb [28]:
Por lo tanto, el disipador que le colocaremos al transistor deberá tener una
resistencia térmica como mínimo de 6.22ºC/W. La elección del modelo, como se
muestra en la figura 33, es el tipo de disipador con un espesor de 48mm.
Una vez obtenido nuestros cálculos de las tres fuentes, para efectos prácticos de
diseño se recomienda usar un transformador con una entrada en el primario y tres
secundarios independientes en la salida del transformador.
85
Inicio
Inicialización de puertos,
Configuración Usart, Lcd
grafico,PWM, Teclado
matricial y I2C(maestro
esclavo)
Mensaje de
Bienvenida
Empezar un
ciclo PCR?
Ingrese los datos:
etapa
inicial,intermedia y
final
To=4°C?
Lectura del
sensor
temperatura
(I2C)
Termino Etapa
inicial?
To=95°C?
Lectura del
sensor
temperatura
(I2C)
Desactivar
PWM
A
Control PWM
(Modifica
Duty cycle)
Control PWM
(Modifica
Duty cycle)
1
NO
Si
NO
Si
Si
NO
NO
Si
Esta Subrutina, se encarga
de modificar el duty cycle de
la PWM para calentar o
enfriar el peltier, de acuerdo
a la temperatura que
deseamos que este.
Esta subrutina se encarga
de obtener los datos del
convertidor análogo digital
vía I2C (maestro esclavo)
hacia el Atmega16L
Preparando
equipo
To < 95.5°C?
To > 94.5°C?
NO
NO
Si
Si
Esta Subrutina, se encarga
de Desactivar la generación
de la PWM.
3.8 Diagrama de Flujo del Programa del Termociclador
86
A
Termino Etapa Intermedia?
Control de
ciclos de
temperatura
Termino Etapa
Final? B
NO
Si
Si
Esta subrutina se encarga
de controlar los diferentes
niveles de temperatura
dentro del ciclo el cual se
desea que se ejecute la
muestra.Pertenece a la
etapa intermedia del proceso
de PCR
To=72°C?
Lectura del
sensor
temperatura
(I2C)
Desactivar
PWM
Control PWM
(Modifica
Duty cycle)
NO
Si
To < 72.5°C?
To > 71.5°C?
NO
NO
Si
Si
NO
87
B
To=4°C?
Lectura del
sensor
temperatura
(I2C)
Control PWM
(Modifica
Duty cycle)
Desea
conservar la
muestra?
Retire la
muestra
1
NO
Si
NO
Si
To=4°C?
Lectura del
sensor
temperatura
(I2C)
Desactivar
PWM
Control PWM
(Modifica
Duty cycle)
NO
Si
To < 4.5°C?
To > 3.5°C?
NO
NO
Si
Si
Reinicia el
Proceso?
NOSi
Nota: Los programas pueden ser revisados en el anexo 3
88
-8
-6
-4
-2
0
2
4
6
8
10
12
0 31 60 91 12
1
15
2
18
2
21
3
24
4
27
4
30
5
33
5
tiempo (s)
co
rr
ie
nt
e
(A
)
cuirva de corriente
Figura 34. Curva de corriente [27]
CAPITULO 4: SIMULACIÓN DEL TERMOCICLADOR
4.1 Simulación del Software de control de temperatura
Para la realización de la simulación de la etapa de control, se trabajó
conjuntamente con la sección de Mecánica, en la obtención de las curvas de
corriente tal como se muestra en la figura 34, el software que se utilizó para la
simulación fue el CosmosWork. De acuerdo a la simulación se determinó que para
la etapa de calentamiento se utilizó 10 A por célula peltier, mientras que para la
etapa de enfriamiento se utilizó 5.5 A por célula peltier.
Este software, dentro de sus librerías, cuenta con células peltiers para poder
simular; para nuestro caso se simuló el funcionamiento del equipo en dos partes
cuando se desea calentar y luego para cuando se desea enfriar, ya que el
programa no cuenta con una simulación simultanea, es decir, el calentar y enfriar
a la vez.
89
Juntamente en Excel se estuvo tomando los datos de la cantidad de corriente que
consume el equipo y los tiempos tal y como se muestra en la figura 34.
4.2 Simulación del sensado de temperatura
Para el sensado de temperatura se realiza una simulación del puente Wheatstone
(ver figura 20), donde T1 y T2 son reemplazados por potenciómetros, como
amplificador operacional se utiliza el INA128 y filtro pasa bajo que a la vez es
también un convertidor AC/DC, se usa el ADS1110, estos últimos mencionados
carecen de componentes para la simulación vía software, por lo que para efectos
prácticos se implementó la configuración del INA128 con amplificadores
operacionales como el LM741 y para la parte del filtro se utilizó el convertidor
AC/DC del Atmega16L.
El pre-escalador da al ADC la señal de sincronización (reloj) cuando al ADC se le
aplica un ‘1’ lógico en su habilitador para empezar la conversión y un ‘0’ lógico
caso contrario, se desactiva la conversión.
Se realizaron pruebas a diferentes temperaturas con valores de T1 y T2 de
1.34KΩ y 6.83KΩ respectivamente para obtener una temperatura de 61°C (ver
figura 35) y para T1 y T2 de 472.4Ω y 2.402KΩ respectivamente para obtener una
temperatura de 95°C (ver figura 36). Con los valores de temperatura obtenidos,
pasa por el amplificador y el convertidor AC/DC y luego se muestra el resultado en
un LCD de caracteres (ver figura 35 y figura 36), debido que para la simulación no
existe librería para el LCD gráfico con el cual se va a trabajar en el proyecto.
90
91
92
4.3. Manejo de la celda Peltier
El dispositivo termoeléctrico Peltier es capaz de absorber o emitir flujo de calor de
acuerdo a la polaridad presente en sus terminales. Para mantener la bandeja porta
muestra a una temperatura determinada es necesario alternar estos valores de
polaridad que se controlan por medio de una onda cuadrada tipo PWM, donde el
ciclo de trabajo indica el mayor o menor grado de calentamiento o enfriamiento. La
magnitud del ciclo de trabajo (duty cycle) se determina en una rutina del programa
del micro controlador. Para efectos de lograr un proceso de PCR exitoso hay que
variar la temperatura del bloque metálico de manera rápida cuando la temperatura
objetivo difiere en gran medida de la temperatura actual.
Como solución a este efecto se trabaja con ciclos PWM según la tabla 3.4 y que
permitirán el cambio de temperatura más adecuado para lograr el objetivo,
teniendo en cuenta que los valores de ciclo de trabajo (Duty cycle) se obtienen de
manera experimental, los valores mostrados en la tabla 3.4 son referenciales:
To (ºC) > Ts (ºC) D.C = 90%
To (ºC) < Ts (ºC) D.C = 10%
Tabla 3.4 Cuadro de valores referenciales de Duty cycle
[Cuadro de elaboración propia]
To: Temperatura de referencia. Es la programada en el micro controlador.
Ts: Temperatura actual medida con el sensor de temperatura.
En donde un 90% de ciclo de trabajo (duty cycle) producirá un mayor
calentamiento del bloque metálico y un 10% producirá un menor calentamiento o
93
lo que es lo mismo la absorción del calor por exceso necesario para mantener la
temperatura de referencia.
Se deja en conocimiento que para la Simulación de los drivers de MOSFETS para
el puente H, no se obtienen librerías para desarrollar dicha simulación, por lo que
se optó por la simulación del puente H clásico como se muestra en la figura 37:
Para la simulación (ver figura 37) se utilizaron los mosfets IRFZ44 (canal N) y
IRF5210 (canal P), que trabajan en región de corte y óhmica, su estado de
conmutación está controlado por la PWM en un determinado periodo y ciclo de
trabajo (Duty cycle). Luego, utilizamos un opto acoplador para separar la parte
digital con la de potencia, el transistor del opto acoplador, actuará en región corte
y saturación. Por último para simular la célula peltier utilizamos un motor DC
conectado a unos inductores y capacitores, actuando como un filtro pasa bajos;
para ver el giro de este y así corroborar como se muestra en la figura 37 el sentido
de la corriente si se desea calentar o enfriar.
94
CONCLUSIONES:
El presente trabajo constituye un paso en el diseño y desarrollo de equipos
médicos de relativa complejidad en el Perú, utilizando herramientas
computacionales y componentes electrónicos, con la finalidad de que
puedan ser fabricados en el futuro próximo. De esta forma se podrían
reducir sus costos, lo que significaría, no solamente un aporte al desarrollo
tecnológico del país, sino también, un aporte al desarrollo de la
investigación en ciencias biológicas y a la mejora de los servicios de salud.
Se ha logrado diseñar un Termociclador de 48 probetas que cumpla con los
requerimientos para lograr un ciclo térmico de PCR exitoso. Alcanzando
una rampa de temperatura de 1.3°C/s, con este valor, se obtuvo la
frecuencia de operación de todo el sistema que conforma el Termociclador
y poder elegir correctamente los componentes electrónicos.
Se ha logrado diseñar y seleccionar componentes electrónicos de alta
calidad en cada etapa que conforma el termociclador, el cual se sustenta
bajo cálculos mostrados en el trabajo de tesis, alcanzando en las
simulaciones un 100% de funcionamiento óptimo.
95
La selección de los componentes para el ingreso de datos y visualización
de resultados se tomo en cuenta que el equipo cuente con tecnología
actualizada.
RECOMENDACIONES:
En caso de que el equipo disipe mucho calor y sobre pase el margen de
error permitido de ±0.5°C, durante el ciclo de PCR, en donde la temperatura
permanece constante, se recomienda implementar un controlador el cual,
permita que la temperatura permanezca constante durante el tiempo
establecido en el ciclo de PCR. Este controlador debe estar implementado
en el micro controlador seleccionado.
Al momento de implementar la fuente de alimentación, tener precaución,
debido a que se maneja niveles de corriente muy altos de 23.57 A, debido a
que esta fuente alimenta todo el sistema del Termociclador.
Se debe verificar realizando pruebas de funcionamiento continuo de cada
componente, sobre todo del ventilador, ya que si el ventilador no entrega
todo el aire necesario, el disipador puede sobrecalentarse y ocasionar así
que el Peltier no trabaje correctamente, provocando errores en el desarrollo
del ciclo PCR.
96
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